嬰幼兒奶粉中5種核苷酸分析報告
案例來源：博納艾杰爾
核苷酸是生命遺傳物質RNA的基本組成單位，是體內合成核酸的前身物。嬰幼兒正處在快速生長發(fā)育階段，身體對核苷酸的需求量超過體內合成核苷酸的能力，但母乳可為嬰幼兒提供所需核苷酸。而對于沒有母乳喂養(yǎng)的嬰幼兒，食用含足量核苷酸的配方奶粉，不僅可提高免疫力，也可保護嬰幼兒腸胃健康。
樣品名稱 | 中文同義名 | 英文簡稱 | 結構式 | 分子式 | 分子量 | CAS號 |
胞嘧啶核苷酸 | 胞苷酸 | CMP | 
| C9H14N3O8P | 323.2 | 63-37-6 |
次黃嘌呤核苷酸 | N/A | IMP | 
| C10H13N4O8P | 348.21 | 131-99-7 |
腺嘌呤核苷酸 | 腺苷酸 | AMP | 
| C10H14N5O7P | 347.22 | 61-19-8 |
尿嘧啶核苷酸 | 尿苷酸 | UMP | 
| C9H13N2O9P | 324.18 | 58-97-9 |
鳥嘌呤核苷酸 | 鳥苷酸 | GMP | 
| C10H14N5O8P | 363.22 | 85-32-5 |
實驗部分
儀器、試劑與材料
主要儀器設備
高效液相色譜儀，紫外檢測器；
試劑材料
屈臣氏水；甲醇為色譜純；磷酸二氫鉀色譜純；磷酸、四丁基硫酸氫銨為分析純；
胞嘧啶核苷酸（胞苷酸）、腺嘌呤核苷酸（腺苷酸）、尿嘧啶核苷酸（尿苷酸）、次黃嘌呤核苷酸、鳥嘌呤核苷酸（鳥苷酸）標準品；
高效液相色譜柱：Venusil ® C18 Plus；5μm，120?，4.6×250mm
樣品制備
5種核苷酸混合標準溶液：分別稱取核苷酸標準品CMP、AMP、UMP各10mg、GMP、IMP各5mg(精確至0.1mg)，用水溶解成并定容至100mL，混勻，即得；
某品牌嬰幼兒奶粉樣品溶液：稱取5.0g奶粉樣品，用20mL熱水(50~60℃)充分溶解試樣，冷卻至室溫；用10%乙酸溶液調節(jié)pH至4.1，移至50mL容量瓶中，定容，濾紙過濾，所得濾液用0.45μm濾膜過濾，即得樣品溶液。
色譜條件
色譜柱：
Venusil ® C18 Plus；5μm，120?，4.6×250mm；
流動相：
稱取1.360g磷酸二氫鉀，加0.4753g四丁基硫酸氫銨至1000mL容量瓶中，用水補齊至刻度，準確加2.5ml磷酸和40mL甲醇，混勻后超聲10min。（備注：由于流動相中含離子對試劑，色譜柱需要先用流動相平衡至少90min后，再運行4針標準品，系統(tǒng)才能穩(wěn)定）
波長：254nm；
柱溫：30℃；
流速：1.0mL/min；
進樣量：10μL。
結果與討論
本實驗按照GB5413.40-2016嬰幼兒食品和乳品中核苷酸的測定中方法，使用Venusil® C18 Plus色譜柱對5種核苷酸混合標準溶液、嬰幼兒奶粉樣品溶液進行檢測，由以下結果可知，嬰幼兒奶粉樣品中五種核苷酸與雜質的分離度大于1.5，回收率97%~109%，滿足實驗需求。
表2.5種核苷酸實驗數(shù)據
樣品名稱 | 化合物名稱 | 保留時間/min | 理論塔板數(shù) | 分離度 | 拖尾因子 | 備注 |
5種核苷酸混標 | CMP | 3.660 | 15803 | — | 0.98 | 圖1 |
AMP | 5.608 | 16882 | 13.46 | 0.97 |
GMP | 11.061 | 18806 | 21.99 | 0.96 |
UMP | 21.226 | 21178 | 22.40 | 0.98 |
IMP | 26.011 | 20584 | 7.30 | 0.99 |
圖1.Venusil ® C18 Plus色譜柱5種核苷酸混標高效液相色譜圖
表3.某品牌嬰幼兒奶粉5種核苷酸實驗數(shù)據
化合物名稱 | 保留時間/min | 分離度 | 拖尾因子 | 備注 |
CMP | 3.659 | — | 0.99 | 圖2 |
雜質1 | 4.342 | 5.73 | - |
AMP | 5.605 | 8.48 | 0.94 |
雜質2 | 6.081 | 2.74 | - |
GMP | 11.051 | 18.91 | 0.97 |
雜質3 | 19.841 | 20.47 | - |
UMP | 21.223 | 2.57 | 0.95 |
IMP | 26.015 | 7.30 | 0.99 |
圖2.Venusil® C18 Plus色譜柱嬰幼兒奶粉樣品溶液高效液相色譜圖
表4.某品牌嬰幼兒奶粉5種核苷酸加標實驗結果
化合物名稱 | 保留時間/min | 加標濃度（ug/mL） | 回收率（%） | 備注 |
CMP | 3.660 | 12.2 | 108.4 | 圖3 |
AMP | 5.605 | 7.6 | 101.8 |
GMP | 11.050 | 9.2 | 97.7 |
UMP | 21.213 | 14.8 | 106.3 |
IMP | 26.028 | 11 | 101.9 |
圖3.Venusil ®C18 Plus色譜柱嬰幼兒奶粉樣品加標溶液高效液相色譜圖
結論
本實驗按照GB5413.40-2016嬰幼兒食品和乳品中核苷酸的測定中方法，使用Venusil® C18 Plus色譜柱對5種核苷酸混合標準溶液、嬰幼兒奶粉樣品溶液進行檢測，結果表明在上述實驗條件下，Venusil®C18 Plus色譜柱可用于嬰幼兒奶粉中5種核苷酸的分析檢測。
相關標準品
| 樣品名稱 | 化合物名稱 | 保留時間/min | 理論塔板數(shù) | 分離度 | 拖尾因子 | 備注 |
| 5種核苷酸混標 | CMP | 3.66 | 15803 | — | 0.98 | 圖1 |
| AMP | 5.608 | 16882 | 13.46 | 0.97 |
| GMP | 11.061 | 18806 | 21.99 | 0.96 |
| UMP | 21.226 | 21178 | 22.4 | 0.98 |
| IMP | 26.011 | 20584 | 7.3 | 0.99 |
其他耗材
產品名稱 | 訂貨號 | 規(guī)格描述 | 包裝數(shù)量 |
Venusil ®C18 Plus | VPS952505-A | 5μm，120?；4.6×250mm | 1支 |
1.5mL樣品瓶 | 1109-0519 | 短螺紋透明帶書寫處 | 100/PK |
32×11.6mm |
1.5mL樣品瓶蓋 | 0915-1819 | 9mm中心孔藍蓋，紅色橡膠/米色PTFE隔墊 | 100/PK |
45 Shore?；1.0mm |
微孔濾膜 | AS021345-T | 單膜，13mm，0.45μm | 100個/包 |
一次性注射器 | LZSQ-2ML | 2mL無針頭 | 100支/包 |
